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緩沖液(Buffer solution)

緩沖液(Buffer solution)通常是由「弱酸及其共軛堿」或「弱堿及其共軛酸」緩沖對所組成的溶液,能夠在加入一定量其他物質時減緩pH的改變。以生物實驗中最常用的一種緩沖液PBS為例,是由Na2HPO4、KH2PO4組成的緩沖對,在PH5.8-8.0范圍內有較強的緩沖能力。在工業上,緩沖溶液常被用于調節染料的pH,緩沖溶液還可以被用于pH計的校正。
緩沖液的作用原理有哪些:
      當往某些溶液中加入一定量的酸和堿,或加少量水稀釋時,溶液有阻礙溶液pH變化的作用,稱為緩沖作用,這樣的溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽的混合溶液(如HOAc與NaOAc),弱堿及其鹽的混合溶液(如NH3·H2O與NH4Cl)等都是緩沖溶液。
作用原理:
     由弱酸HA及其鹽NaA所組成的緩沖溶液對酸的緩沖作用,是由于溶液中存在足夠量的堿A-的緣故。當向這種溶液中加入一定量的強酸時,H+離子基本上被A-離子消耗:所以溶液的pH值幾乎不變;當加入一定量強堿時,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-離子而阻礙pH的變化。在緩沖溶液中加入少量強酸或強堿,其溶液pH值變化不大,但若加入酸,堿的量多時,緩沖溶液就失去了它的緩沖作用。這說明它的緩沖能力是有一定限度的。緩沖溶液的緩沖能力與組成緩沖溶液的組分濃度有關。0.1mol·L-1HAc和0.1mol· L1NaAc組成的緩沖溶液,比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的緩沖溶液緩沖能力大。關于這一點通過計算便可證實。但緩沖溶液組分的濃度不能太大,否則,不能忽視離子間的作用。組成緩沖溶液的兩組分的比值不為1∶1時,緩沖作用減小,緩沖能力降低,當c(鹽)/c(酸)為1∶1時△pH小,緩沖能力大。不論對于酸或堿都有較大的緩沖作用。緩沖溶液的pH值可用下式計算:此時緩沖能力大。緩沖組分的比值離1∶1愈遠,緩沖能力愈小,甚至不能起緩沖作用。對于任何緩沖體系,存在有效緩沖范圍,這個范圍大致在pKaφ(或pKbφ)兩側各一個pH單位之內。
常見的TRIS緩沖液
      Tris全稱為三羥甲基氨基甲烷,又叫氨基丁三醇,CAS號為77-86-1,外觀為白色結晶粉末。可溶于乙醇和水,也會與乙酸乙酯溶解但是比較緩慢,不與乙醚、四氯化碳,對銅、鋁有腐蝕作用。
Tris大量應用于急性代謝性及呼吸性酸血癥,屬于一種堿性緩沖劑,對代謝酸中毒和酶活動反應具有良好的緩沖作用,可能引起低血糖、低血壓、惡心、嘔吐。甚至會抑制呼吸導致呼吸停止。過量攝入或者腎功能不全時可引起堿血癥。當Tris和酸量滴定法基準物質使用時,純度要求會很高,基本為99.9%-100%
Tris因為是弱堿性,在溫度為25℃以下時,Pka為8.1,但是依據緩沖理論,它的有效緩沖范圍在PH7.0-9.2之間。而Tris的水溶液PH在10.5左右,一般用加鹽酸來調節PH值到所需值,不過同時也要注意溫度對Tris的Pka的影響。由于Tris緩沖液是弱堿性溶液,DNA會在溶液里被去質子化,從而提高其溶解性。所以經常有人在Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成TE緩沖液,而且把PH值調節的溶液換成乙酸,就可以獲得TAE緩沖液。
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